Merci fir besicht Nature.com. D'Browser Versioun déi Dir benotzt huet limitéiert CSS Ënnerstëtzung. Fir bescht Resultater, empfeelen mir e méi neie Browser ze benotzen (oder de Kompatibilitéitsmodus am Internet Explorer auszeschalten). An der Tëschenzäit, fir weider Ënnerstëtzung ze garantéieren, wäerte mir de Site ouni Stiler a JavaScript weisen.
D'Grënnung vun Déiermodeller vu Modic Change (MC) ass eng wichteg Basis fir MC ze studéieren. Fofzeg-véier Neuseeland White Kanéngercher sech an sham-Operatioun Grupp ënnerdeelt, Muskel Implantatioun Grupp (ME Grupp) an nucleus pulposus Implantatioun Grupp (NPE Grupp). An der NPE-Grupp gouf d'intervertebral Disc duerch anterolateral Lendeger chirurgesch Approche ausgesat an eng Nadel gouf benotzt fir de L5 Wirbelkierper no bei der Ennplack ze punktéieren. NP gouf aus der L1/2 intervertebral Disc vun enger Sprëtz extrahéiert an an et injizéiert. Drilling e Lach am subchondralen Knach. Déi chirurgesch Prozeduren an Buermethoden an der Muskelimplantatiounsgrupp an der Schamoperatiounsgrupp waren déiselwecht wéi déi an der NP-Implantatiounsgrupp. An der ME-Grupp gouf e Stéck Muskel an d'Lach gesat, während an der Sham-Operatiounsgrupp näischt an d'Lach geluecht gouf. No der Operatioun goufen MRI Scannen a molekulare biologesch Tester gemaach. D'Signal an der NPE-Grupp huet geännert, awer et gouf keng offensichtlech Signalverännerung an der Sham-Operatiounsgrupp an der ME Grupp. Histologesch Observatioun huet gewisen datt anormal Tissueverbreedung op der Implantatiounsplaz observéiert gouf, an den Ausdrock vun IL-4, IL-17 an IFN-γ gouf an der NPE Grupp erhéicht. Implantatioun vum NP an de subchondrale Knach kann en Déiermodell vum MC bilden.
Modesch Verännerungen (MC) sinn Läsionen vun de vertebralen Endplaten an de benachbarte Knueweess sichtbar op Magnéitesch Resonanz Imaging (MRI). Si sinn zimlech heefeg bei Individuen mat verbonne Symptomer1. Vill Studien hunn d'Wichtegkeet vum MC betount wéinst senger Associatioun mat nidderegen Réckschmerzen (LBP) 2,3. de Roos et al.4 a Modic et al.5 hunn onofhängeg éischt dräi verschidden Zorte vu subchondralen Signalabnormalitéiten am vertebrale Knochenmark beschriwwen. Modesch Typ I Verännerungen sinn hypointens op T1-gewiicht (T1W) Sequenzen an hyperintens op T2-gewiicht (T2W) Sequenzen. Dës Läsion entdeckt Fissurenendplacken an ugrenzend vaskulär Granulatiounsgewebe am Knueweess. Modic Typ II Ännerungen weisen héich Signal op béid T1W an T2W Sequenzen. An dëser Aart vu Läsion kann d’Endplat Zerstéierung fonnt ginn, wéi och histologesch Fett Ersatz vum ugrenzend Knochenmark. Modic Typ III Ännerungen weisen niddereg Signal an T1W an T2W Sequenzen. Sklerotesch Läsionen entspriechend den Endplaten goufen observéiert6. MC gëtt als pathologesch Krankheet vun der Wirbelsäule ugesinn an ass enk mat villen degenerative Krankheeten vun der Wirbelsäule verbonnen7,8,9.
Wann Dir déi verfügbar Donnéeën berücksichtegt, hu verschidde Studien detailléiert Abléck an d'Ätiologie a pathologesch Mechanismen vum MC geliwwert. Albert et al. proposéiert datt MC duerch Disc Herniation verursaacht ka ginn8. Hu et al. zougeschriwwen MC zu schwéieren disc Degeneratioun10. Kroc huet d'Konzept vun "intern Disc Broch" proposéiert, wat seet datt repetitive Disc Trauma kann zu Mikrotréinen an der Endplate féieren. No der Spaltbildung kann d'Ennplack Zerstéierung vum Nukleus Pulposus (NP) eng Autoimmunreaktioun ausléisen, wat weider zur Entwécklung vum MC11 féiert. Ma et al. gedeelt eng ähnlech Vue a gemellt datt NP-induzéiert Autoimmunitéit eng Schlësselroll an der Pathogenese vu MC12 spillt.
Immunsystemzellen, besonnesch CD4+ T Helper-Lymphozyten, spillen eng kritesch Roll an der Pathogenese vun der Autoimmunitéit13. De kierzlech entdeckt Th17 Ënnerdeel produzéiert de proinflammatoreschen Zytokin IL-17, fördert d'Chemokin Ausdrock, a stimuléiert T Zellen a beschiedegt Organer fir IFN-γ14 ze produzéieren. Th2 Zellen spillen och eng eenzegaarteg Roll an der Pathogenese vun Immunreaktiounen. Ausdrock vun IL-4 als representativ Th2 Zell kann zu schwéieren immunopathological Konsequenze Féierung15.
Och wa vill klinesch Studien iwwer MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 duerchgefouert goufen, gëtt et nach ëmmer e Manktem u gëeegent Déierexperimentell Modeller déi de MC-Prozess imitéiere kënnen, deen dacks bei Mënschen optrieden a ka sinn. benotzt fir d'Ätiologie z'ënnersichen oder nei Behandlungen wéi geziilte Therapie. Bis haut sinn nëmmen e puer Déiermodeller vu MC gemellt ginn fir déi ënnerierdesch pathologesch Mechanismen ze studéieren.
Baséierend op der Autoimmun Theorie proposéiert vum Albert a Ma, huet dës Etude en einfachen a reproduzéierbare Kanéngchen MC Modell etabléiert andeems NP no bei der gebierter Wirbelsplack autotransplantéiert. Aner Ziler sinn d'histologesch Charakteristike vun den Déiermodeller ze beobachten an d'spezifesch Mechanismen vum NP an der Entwécklung vum MC ze evaluéieren. Zu dësem Zweck benotze mir Techniken wéi Molekularebiologie, MRI, an histologesch Studien fir de Fortschrëtt vum MC ze studéieren.
Zwee Kanéngercher stierwen u Blutungen während der Chirurgie, a véier Huesen stierwen während Anästhesie während MRI. Déi reschtlech 48 Kanéngercher hunn iwwerlieft a weisen keng Verhalens- oder neurologësch Zeeche no der Operatioun.
MRI weist datt d'Signalintensitéit vum embedded Tissu a verschiddene Lächer anescht ass. D'Signalintensitéit vum L5 Wirbelkierper an der NPE-Grupp huet sech no 12, 16 an 20 Wochen no der Insertioun lues a lues geännert (T1W Sequenz huet niddereg Signal gewisen, an T2W Sequenz huet gemëscht Signal plus niddereg Signal gewisen) (Fig. 1C), während d'MRI Erscheinungen vun den aneren zwou Gruppen vun agebonnen Deeler bliwwen relativ stabil während der selwechter Period (Lalumi 1A, B).
(A) Representativ sequenziell MRIs vun der Kanéngchen Lendegéigend op 3 Zäitpunkten. Kee Signalabnormalitéite goufen an de Biller vun der Scham-Operatiounsgrupp fonnt. (B) D'Signalcharakteristike vum Wirbelkierper an der ME-Grupp sinn ähnlech wéi déi an der Sham-Operatiounsgrupp, a keng bedeitend Signalverännerung gëtt op der Embedding-Site iwwer Zäit observéiert. (C) An der NPE Grupp ass de niddereg Signal kloer an der T1W Sequenz siichtbar, an de gemëschte Signal an niddereg Signal si kloer an der T2W Sequenz siichtbar. Vun der 12-Wochen-Period op d'20-Wochen-Period falen déi sporadesch héich Signaler ronderëm déi niddereg Signaler an der T2W-Sequenz erof.
Offensichtlech Knochenhyperplasie kann op der Implantatiounsplaz vum Wirbelkierper an der NPE-Grupp gesi ginn, an d'Knachhyperplasie geschitt méi séier vun 12 bis 20 Wochen (Fig. 2C) am Verglach mat der NPE-Grupp, gëtt keng bedeitend Ännerung an der modelléierter Wirbelsituatioun observéiert. Kierper; Sham Grupp an ME Grupp (Figebam. 2C) 2A, B).
(A) D'Uewerfläch vum vertebrale Kierper am implantéierten Deel ass ganz glat, d'Lach heelt gutt, an et gëtt keng Hyperplasie am Wirbelkierper. (B) D'Form vum implantéierte Site an der ME Grupp ass ähnlech wéi déi an der Sham Operatiounsgrupp, an et gëtt keng offensichtlech Ännerung am Erscheinungsbild vum implantéierte Site iwwer Zäit. (C) Knochenhyperplasie ass op der implantéierter Plaz an der NPE-Grupp geschitt. D'Knachhyperplasie ass séier eropgaang a souguer duerch d'intervertebral Disc op de kontralateralen Wirbelkierper verlängert.
Histologesch Analyse liwwert méi detailléiert Informatiounen iwwer Knachbildung. Figur 3 weist d'Fotoen vun der Thes Rubriken Kierchefënster mat H & E. Am Sham-Operatioun Grupp, goufen d'chondrocytes gutt arrangéiert a keng Zell Prolifératioun fonnt (Lalumi 3A). D'Situatioun an der ME Grupp war ähnlech wéi déi an der Scham-Operatiounsgrupp (Fig. 3B). Allerdéngs, an der NPE Grupp, goufen eng grouss Zuel vun chondrocytes a Prolifératioun vun NP-wëll Zellen op der implantation Site observéiert (Lalumi 3C);
(A) Trabeculae kënnen no bei der Ennplack gesi ginn, d'Chondrocyten sinn ordentlech mat enger eenheetlecher Zellgréisst a Form a keng Verbreedung arrangéiert (40 Mol). (B) Den Zoustand vun der Implantatiounsplaz an der ME Grupp ass ähnlech wéi déi vun der Schamgrupp. Trabeculae a Chondrocyte kënne gesi ginn, awer et gëtt keng offensichtlech Verbreedung op der Implantatiounsplaz (40 Mol). (B) Et kann gesi ginn datt Chondrocyten an NP-ähnlech Zellen wesentlech proliferéieren, an d'Form an d'Gréisst vun de Chondrocyten sinn ongläich (40 Mol).
Den Ausdrock vun Interleukin 4 (IL-4) mRNA, Interleukin 17 (IL-17) mRNA, an Interferon γ (IFN-γ) mRNA goufen a béid NPE a ME Gruppen observéiert. Wann d'Ausdrock Niveau vun Zil- Genen Verglach goufen, goufen d'Gen Ausdrock vun IL-4, IL-17, an IFN-γ bedeitend an der NPE Grupp vergréissert Verglach mat deene vun der ME Grupp an der sham Operatioun Grupp (Lalumi 4) (P < 0,05). Am Verglach mat der sham Operatioun Grupp, den Ausdrock Niveau vun IL-4, IL-17, an IFN-γ an der ME Grupp fräi nëmmen liicht an net statistesch Ännerung erreecht (P & GT; 0,05).
D'mRNA Ausdrock vun IL-4, IL-17 an IFN-γ an der NPE Grupp huet e wesentlech méi héich Trend wéi déi an der sham Operatioun Grupp an der ME Grupp (P <0,05).
Am Géigesaz, huet den Ausdrock Niveauen an der ME Grupp kee groussen Ënnerscheed (P> 0,05).
Western blot Analyse war mat kommerziell sinn antibodies géint IL-4 an IL-17 gesuergt der verännert mRNA Ausdrock Muster ze confirméieren. Wéi an de Figuren 5A, B gewisen, am Verglach mat der ME Grupp an der Schamoperatiounsgrupp, goufen d'Proteinniveauen vun IL-4 an IL-17 an der NPE Grupp wesentlech erhéicht (P <0,05). Am Verglach mat der Sham Operatioun Grupp, hunn d'Proteinniveauen vun IL-4 an IL-17 an der ME Grupp och statistesch bedeitend Ännerungen (P> 0,05) erreecht.
(A) D'Proteinniveauen vun IL-4 an IL-17 an der NPE Grupp waren wesentlech méi héich wéi déi an der ME Grupp an der Placebo Grupp (P <0.05). (B) Western blot histogram.
Wéinst der limitéierter Unzuel vu mënschleche Proben, déi während der Operatioun kritt goufen, sinn kloer an detailléiert Studien iwwer d'Pathogenese vum MC e bësse schwéier. Mir hu probéiert en Déiermodell vu MC ze etabléieren fir seng potenziell pathologesch Mechanismen ze studéieren. Zur selwechter Zäit goufen radiologesch Evaluatioun, histologesch Evaluatioun a molekulare biologesch Evaluatioun benotzt fir de Laf vun MC entschlof vun NP autograft ze verfollegen. Als Resultat huet den NP-Implantatiounsmodell zu enger gradueller Ännerung vun der Signalintensitéit vun 12-Wochen bis 20-Wochen Zäitpunkte gefouert (gemëscht niddereg Signal an T1W Sequenzen a niddereg Signal an T2W Sequenzen), wat Tissuverännerungen ugeet, an déi histologesch a molekulare biologesch Evaluatioune bestätegt d'Resultater vun der radiologescher Studie.
D'Resultater vun dësem Experiment weisen datt visuell an histologesch Verännerungen op der Plaz vun der vertebrale Kierperverletzung an der NPE-Grupp geschitt sinn. Zur selwechter Zäit gouf den Ausdrock vun IL-4, IL-17 an IFN-γ Genen, souwéi IL-4, IL-17 an IFN-γ beobachtet, wat beweist datt d'Verletzung vum autologen Nukleus Pulposus Tissu an der Wirbelsäit. Kierper kann eng Serie vu Signal a morphologesch Verännerungen verursaachen. Et ass einfach ze fannen datt d'Signalcharakteristike vun de Wirbelkierper vum Déiermodell (niddereg Signal an der T1W Sequenz, gemëscht Signal a niddereg Signal an der T2W Sequenz) ganz ähnlech sinn wéi déi vu mënschleche Wirbelzellen, an d'MRI Charakteristiken och bestätegen d’Beobachtungen vun der Histologie a Brutto Anatomie, dat heescht, d’Verännerungen an de Wirbelkierperzellen sinn progressiv. Och wann d'entzündlech Äntwert, déi duerch akuter Trauma verursaacht gëtt, séier no der Punktéierung erscheint, hunn d'MRI Resultater gewisen datt progressiv Erhéijung vun der Signalverännerungen 12 Wochen no der Punktur erschéngen a bis zu 20 Wochen bestoe bliwwen ouni Zeeche vun der Erhuelung oder ëmgedréint MRI Ännerungen. Dës Resultater suggeréieren datt autolog vertebral NP eng zouverlässeg Method ass fir progressiv MV bei Kanéngercher z'etabléieren.
Dëse Punktmodell erfuerdert adäquat Fäegkeet, Zäit a chirurgesch Ustrengung. A virleefeg Experimenter, Dissektioun oder exzessiv Stimulatioun vun de paravertebrale ligamentous Strukturen kann zu der Bildung vu vertebralen Osteophyten féieren. Opgepasst sollte geholl ginn fir déi benachbar Discs net ze beschiedegen oder ze irritéieren. Well d'Tiefe vun der Pénétratioun muss kontrolléiert ginn fir konsequent a reproduzéierbar Resultater ze kréien, hu mir manuell e Stecker gemaach andeems d'Schëller vun enger 3 mm laanger Nadel ofgeschnidden ass. Mat dësem Stecker garantéiert eenheetlech Buerdéift am Wirbelkierper. A virleefeg Experimenter hunn dräi orthopädesch Chirurgen, déi an der Operatioun involvéiert sinn, fonnt datt 16-Jauge Nadelen méi einfach ze schaffen wéi 18-Jauge Nadelen oder aner Methoden. Fir exzessiv Blutungen beim Bueren ze vermeiden, d'Nadel nach eng Zäit laang ze halen, gëtt e méi passend Insertion Lach, wat suggeréiert datt e gewësse Grad vu MC op dës Manéier kontrolléiert ka ginn.
Och wa vill Studien MC gezielt hunn, ass wéineg iwwer d'Ätiologie a Pathogenese vu MC25,26,27 bekannt. Baséierend op eise fréiere Studien hu mir festgestallt datt d'Autoimmunitéit eng Schlësselroll bei der Optriede an der Entwécklung vum MC12 spillt. Dës Etude iwwerpréift de quantitativen Ausdrock vun IL-4, IL-17, an IFN-γ, déi d'Haaptdifferenzéierungsweeër vun CD4 + Zellen no Antigen Stimulatioun sinn. An eiser Etude, am Verglach mat der negativ Grupp, huet d'NPE Grupp méi héich Ausdrock vun IL-4, IL-17, an IFN-γ, an de Protein Niveauen vun IL-4 an IL-17 waren och méi héich.
Klinesch gëtt den IL-17 mRNA Ausdrock an NP Zellen vu Patienten mat Disc Herniation erhéicht28. Erhéicht IL-4 an IFN-γ Ausdrockniveauen goufen och an engem akuten net-kompressive Disc Herniation Modell am Verglach mat gesonde Kontrollen29 fonnt. IL-17 spillt eng Schlësselroll bei der Entzündung, Gewëssverletzung bei Autoimmunerkrankungen30 a verbessert d'Immunreaktioun op IFN-γ31. Verbesserte IL-17-vermittelten Tissue Verletzung gouf an MRL / lpr Mais32 an Autoimmunitéit-empfindlech Mais33 gemellt. IL-4 kann den Ausdrock vun proinflammatoreschen Zytokine (wéi IL-1β an TNFα) a Makrophageaktivéierung34 hemmen. Et gouf gemellt datt d'mRNA Ausdrock vun IL-4 an der NPE Grupp anescht war wéi IL-17 an IFN-γ zur selwechter Zäitpunkt; D'mRNA Ausdrock vun IFN-γ an der NPE Grupp war wesentlech méi héich wéi déi an den anere Gruppen. Dofir kann d'IFN-γ Produktioun e Vermëttler vun der entzündlecher Äntwert sinn, déi duerch NP Interkalatioun induzéiert gëtt. Studien hu gewisen datt IFN-γ vu multiple Zelltypen produzéiert gëtt, dorënner aktivéiert Typ 1 Helper T Zellen, natierlech Killerzellen, a Makrophagen35,36, an ass e Schlëssel pro-inflammatoreschen Zytokin deen d'Immunreaktiounen fördert37.
Dës Studie hindeit datt d'Autoimmunreaktioun an d'Optriede an d'Entwécklung vu MC involvéiert ka sinn. Luoma et al. fonnt datt d'Signalcharakteristike vu MC a prominent NP ähnlech sinn op MRI, a béid weisen héich Signal an der T2W Sequenz38. E puer Zytokine goufe bestätegt enk mat der Optriede vu MC verbonnen, sou wéi IL-139. Ma et al. proposéiert datt den Upward oder Downward Protrusion vun NP e groussen Afloss op d'Optriede an d'Entwécklung vun MC12 hunn. Bobechko40 an Herzbein et al.41 gemellt datt NP en immunotolerant Tissu ass, deen net vun der Gebuert an d'vaskulär Zirkulatioun eran kënnt. NP-Protrusiounen féieren auslännesch Kierper an d'Bluttversuergung, doduerch lokal Autoimmunreaktiounen vermëttelen42. Autoimmunreaktiounen kënnen eng grouss Zuel vun Immunfaktoren induzéieren, a wann dës Faktore kontinuéierlech u Stoffer ausgesat sinn, kënne se Verännerungen an der Signaliséierung verursaachen43. An dëser Etude, overexpression vun IL-4, IL-17 an IFN-γ sinn typesch immun Faktoren, weider beweist der enk Relatioun tëscht NP an MCs44. Dësen Déiermodell mimics gutt den NP Duerchbroch an d'Entrée an d'Ennplack. Dëse Prozess huet weider den Impakt vun der Autoimmunitéit op MC opgedeckt.
Wéi erwaart gëtt dësen Déiermodell eis eng méiglech Plattform fir MC ze studéieren. Wéi och ëmmer, dëse Modell huet nach e puer Aschränkungen: éischtens, während der Déiereobservatiounsphase, musse e puer Zwëschenzäit Huesen euthaniséiert ginn fir histologesch a molekulare Biologesch Tester, sou datt e puer Déieren mat der Zäit "aus der Notzung falen". Zweetens, obwuel dräi Zäitpunkte an dëser Etude gesat ginn, leider hu mir nëmmen eng Zort MC modelléiert (Modic Typ I änneren), also ass et net genuch fir de mënschleche Krankheetentwécklungsprozess ze representéieren, a méi Zäitpunkte musse festgeluecht ginn besser all Signal Ännerungen observéieren. Drëttens kënnen d'Verännerungen an der Tissuestruktur jo kloer duerch histologesch Färzen gewise ginn, awer e puer spezialiséiert Technike kënnen d'mikrostrukturell Ännerungen an dësem Modell besser opdecken. Zum Beispill gouf polariséiert Liichtmikroskopie benotzt fir d'Bildung vu Fibrokartilage an Kanéngchen intervertebral Discs45 ze analyséieren. Déi laangfristeg Effekter vum NP op MC an Endplate erfuerderen weider Studie.
Fofzeg-véier männlech Neuseeland wäiss Kanéngercher (Gewiicht ongeféier 2,5-3 kg, Alter 3-3,5 Méint) goufen zoufälleg an sham Operatioun Grupp ënnerdeelt, Muskel Implantatioun Grupp (ME Grupp) an Nerve Wuerzel Implantatioun Grupp (NPE Grupp). All experimentell Prozeduren goufen vun der Ethik Comité vun Tianjin Spidol guttgeheescht, an der experimentell Methode goufen am strikt Aklang mat der guttgeheescht Richtlinnen duerchgefouert.
E puer Verbesserungen goufen op d'chirurgesch Technik vum S. Sobajima 46 gemaach. All Kanéngchen gouf an enger lateraler Recumbency Positioun plazéiert an d'anterior Uewerfläch vu fënnef konsekutiv Lendeger intervertebral Discs (IVDs) gouf mat enger posterolateraler retroperitonealer Approche ausgesat. All Kanéngchen gouf allgemeng Anästhesie kritt (20% Urethan, 5 ml / kg iwwer d'Ouerven). E longitudinal Hautschnëtt gouf vun der ënneschter Kante vun de Rippen bis zum Beckenrand gemaach, 2 cm ventral zu de paravertebrale Muskelen. Déi richteg anterolateral Wirbelsäule vu L1 bis L6 gouf duerch scharf a stompeg Dissektioun vum iwwerlageren subkutane Tissu, retroperitonealen Tissu a Muskelen ausgesat (Fig. 6A). Den Disc-Niveau gouf mat der Beckenrand als anatomescht Landmark fir den L5-L6 Disc-Niveau bestëmmt. Benotzt eng 16-Meter-Punktéierungsnadel fir e Lach no bei der Endplack vun der L5 Wirbel op eng Tiefe vun 3 mm ze bueren (Fig. 6B). Benotzt eng 5-ml Sprëtz fir den autologen Nukleus Pulposus an der L1-L2 intervertebral Disc ze aspiréieren (Fig. 6C). Ewechzehuelen de nucleus pulposus oder Muskel no den Ufuerderunge vun all Grupp. Nodeems d'Bohrloch verdéift ass, ginn absorbéierbar Suturen op déi déif Fascia, iwwerflächlech Fascia an Haut plazéiert, oppassen net de periostealen Tissu vum Wirbelkierper während der Operatioun ze beschiedegen.
(A) D'L5-L6 Disc ass iwwer eng posterolateral retroperitoneal Approche ausgesat. (B) Benotzt eng 16-Meter Nadel fir e Lach no bei der L5 Ennplack ze bueren. (C) Autolog MFs ginn gesammelt.
Allgemeng Anästhesie gouf mat 20% Urethane (5 ml /kg) verwalt iwwer d'Ouervene verwalt, a Lendeger Wirbelsäule goufen op 12, 16 an 20 Wochen postoperativ widderholl.
Huesen goufen duerch intramuskulär Injektioun vu Ketamin (25,0 mg / kg) an intravenös Natriumpentobarbital (1,2 g / kg) bei 12, 16 an 20 Wochen no der Operatioun geaffert. Déi ganz Wirbelsäule gouf fir histologesch Analyse geläscht a richteg Analyse gemaach. Quantitativ ëmgedréint Transkriptioun (RT-qPCR) a Western Blotting goufen benotzt fir Ännerungen an Immunfaktoren z'entdecken.
MRI Examen goufen an Kanéngercher mat engem 3.0 T klineschen Magnéit (GE Medical Systems, Florence, SC) ausgestatt mat engem orthogonalen Gliedspiralempfänger. Huesen goufen mat 20% Urethan (5 ml / kg) iwwer d'Ouerven anästhetiséiert an duerno am Magnéit mat der Lendegéigend zentréiert op enger 5-Zoll Duerchmiesser kreesfërmeg Uewerflächspiral (GE Medical Systems) gesat. Coronal T2-gewiicht Lokaliséierbiller (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) goufen erfaasst fir d'Plaz vun der Lendegerschei vu L3-L4 bis L5-L6 ze definéieren. Sagittal Fliger T2-gewiicht Scheiwen goufen mat de folgenden Astellungen erfaasst: séier Spin-Echo-Sequenz mat enger Widderhuelungszäit (TR) vun 2200 ms an enger Echozäit (TE) vun 70 ms, Matrix; visuellt Feld vun 260 an aacht Reizen; D'Schneiddicke war 2 mm, d'Spalt war 0,2 mm.
Nodeem déi lescht Foto geholl gouf an de leschte Kanéngchen ëmbruecht gouf, goufen d'Sham, d'Muskelbefestegt an d'NP-Discs fir histologesch Untersuchung geläscht. Tissue goufen an 10% neutral gebuffert Formalin fir 1 Woch fixéiert, mat Ethylendiamintetraacetic Seier decalcified, an paraffin Sektioun. Tissueblocken goufen a Paraffin agebonnen an a sagittal Sektiounen (5 μm déck) geschnidden mat engem Mikrotom. Sektiounen sech mat hematoxylin an eosin (H & E) Kierchefënster.
Nodeem d'Intervertebral Discs aus den Huesen an all Grupp gesammelt goufen, gouf total RNA extrahéiert mat enger UNIQ-10 Kolonn (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) no den Instruktioune vum Hiersteller an engem ImProm II ëmgedréint Transkriptiounssystem (Promega Inc. , Madison, WI, USA). Ëmgedréint Transkriptiouns gouf gemaach.
RT-qPCR war mat engem Prism gesuergt 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) an SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) no den Hiersteller d'Instruktioune. De PCR Reaktiounsvolumen war 20 μl an enthält 1,5 μl verdënntem cDNA an 0,2 μM vun all Primer. Primer goufen vun OligoPerfect Designer entworf (Invitrogen, Valencia, CA) an hiergestallt vun Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (China) (Table 1). Déi folgend thermesch Cycling Bedéngungen goufen benotzt: initial Polymerase Aktivatioun Schrëtt bei 94 ° C fir 2 min, dann 40 Zyklen vun 15 s all op 94 ° C fir Schabloun Denaturatioun, annealing fir 1 min bei 60 ° C, Extensioun, a fluorescence. Miessunge goufen fir 1 min bei 72 ° C gemaach. All Echantillon waren dräimol amplified an der Moyenne Wäert war fir RT-qPCR Analyse benotzt. Amplification Daten goufen benotzt FlexStation 3 (Molecular Apparater, Sunnyvale, CA, USA) analyséiert. IL-4, IL-17, an IFN-γ Gentherapie Ausdrock sech un der endogenous Kontroll (ACTB) normalized. Relativ Ausdrock Niveauen vun Zil- mRNA sech mat der 2-ΔΔCT Method berechent.
Total Protein gouf aus Stoffer extrahéiert mat engem Tissuehomogenisator am RIPA Lysis-Puffer (enthält e Protease- a Phosphatase-Inhibitor Cocktail) an duerno bei 13.000 Rpm fir 20 min bei 4 ° C centrifugéiert fir Tissuebriecher ze läschen. Fofzeg Mikrogramm Protein goufen pro Spur gelueden, getrennt vun 10% SDS-PAGE, an dann op eng PVDF Membran transferéiert. D'Blockéierung gouf a 5% nonfat trockenem Mëllech an Tris-gebufferter Salins (TBS) mat 0,1% Tween 20 fir 1 h bei Raumtemperatur gemaach. D'Membran gouf mat Kanéngchen Anti-Decorin primären Antikörper (verdünnt 1:200; Boster, Wuhan, China) (verdünnt 1:200; Bioss, Peking, China) Iwwernuechtung bei 4 ° C inkubéiert an op den zweeten Deeg reagéiert; mat sekundären Antikörper (Geess Anti-Kanéngchen Immunoglobulin G bei 1:40.000 Verdünnung) kombinéiert mat Meerrettichperoxidase (Boster, Wuhan, China) fir 1 Stonn bei Raumtemperatur. Western blot Signaler sech duerch fräi chemiluminescence op der chemiluminescent Membran no X-Ray Bestrahlung fonnt. Fir densitometric Analyse goufen Blots gescannt a quantifizéiert mat BandScan Software an d'Resultater goufen als de Verhältnis vun der Zil-Gen-Immunreaktivitéit zu der Tubulin-Immunreaktivitéit ausgedréckt.
Statistesch Berechnungen goufen mat der SPSS16.0 Software Package (SPSS, USA) gesuergt. D'Donnéeën, déi während der Studie gesammelt goufen, goufen als mëttleren ± Standarddeviatioun (mëttler ± SD) ausgedréckt an analyséiert mat engersäits widderholl Moossanalyse vun Varianz (ANOVA) fir Differenzen tëscht den zwou Gruppen ze bestëmmen. P <0,05 war statistesch bedeitendst considéréiert.
Also kann d'Grënnung vun engem Déiermodell vu MC duerch d'Implantatioun vun autologen NPs an de Wirbelkierper a Makroanatomesch Observatioun, MRI Analyse, histologesch Evaluatioun a molekulare biologesch Analyse e wichtegt Instrument ginn fir d'Mechanismen vum mënschleche MC ze bewäerten an ze verstoen an nei therapeutesch Entwécklung z'entwéckelen. Interventiounen.
Wéi zitéiert dësen Artikel: Han, C. et al. En Déiermodell vu Modic Verännerungen gouf etabléiert andeems en autologen Nucleus Pulposus an de subchondrale Knach vun der Lendegerwirbels implantéiert. Sci. Rep 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., and Boos, N. Magnéitesch Resonanzbildung vun der Lendegerwirbelsäule: Prävalenz vun der Disc Herniation a Retention, Nerve Root Kompressioun, Ennplackabnormalitéiten a Facettgelenk Osteoarthritis bei asymptomatesche Fräiwëlleger. . Taux. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, and Leboeuf-Eed, K. Modic Ännerungen an hir Relatioun zu klineschen Erkenntnisser. European Spine Journal: offiziell Publikatioun vun der European Spine Society, der European Society of Spinal Deformity, and the European Society for Cervical Spine Research 15, 1312-1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Modesch Verännerungen an de Lendeger Wirbelsplacken: Prävalenz an Associatioun mat nidderegen Réckschmerzen an Ischias bei mëttelalterleche männlechen Aarbechter. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., and Dalinka, M. MRI vu Knueweessännerungen no bei der Endplack bei degenerative Krankheeten vun der Lendegerwirbelsäule. AJR. American Journal of Radiology 149, 531-534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, and Carter, JR. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic MT, Masaryk TJ, Ross JS, Carter JR Imaging vun degenerative Disc Krankheet. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prädiktoren vun der Neovertebral Endplate (Modic) Signal Ännerungen an der allgemenger Bevëlkerung. European Spine Journal: Offiziell Publikatioun vun der Europäescher Wirbelsäule, der Europäescher Gesellschaft fir Spinal Deformitéit, an der Europäescher Gesellschaft fir Gebärmutterkierperfuerschung, Divisioun 19, 129-135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB a Mannisch, K. Modic Ännerungen no der Lendeger Disc Herniation. European Spine Journal: Offiziell Verëffentlechung vun der Europäescher Wirbelsäule, der Europäescher Gesellschaft fir Spinal Deformitéit an der Europäescher Gesellschaft fir Gebärmutterkierperfuerschung 16, 977-982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., a Kaapa, E. Modic Typ I Ännerungen kënne séier progressiv Deformatiounsdisk Degeneratioun viraussoen: eng 1-Joer prospektiv Studie. European Spine Journal 21, 1135-1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ a Fan, SW Modic Ännerungen: méiglech Ursaachen a Bäitrag zu Lendeger Disc Degeneratioun. Medical Hypotheses 73, 930-932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Interne disc rupture. Disc Prolaps Problemer iwwer 50 Joer. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650-653 (1986).
Post Zäit: Dez-13-2024